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周一放送:技术人员对ELISA试剂盒实验怎么说
点击次数:17次 发布时间:2019-05-27 返回

        根据个人的实验经验,大家都或多或少掌握了一些小技巧。zui终的实验结果是受整个操作过程及试剂本身影响的,所以还要多学习,多参考,让实验结果数据达到预期值。ELISA检测系统是免疫学反应应用到科研生产中zui为广泛zui为灵敏的技术手段,有着十分重要的作用。下面是上海劲马技术人员对ELISA试剂盒实验的经验讲谈:

一、包被原的性质很重要
        蛋白浓度,是否降解,这关系到您做出的抗体可不可以被其识别,所以保存抗原很重要,做重组蛋白时,一定要在冰浴下缓慢融化,有的包被原可能不是蛋白,对于生物素和脂类物质或小分子物质要事先对其改造再加以包被。
        1.亲和素生物素:先亲和素先包被载体,加入生物素化的DNA,这种包被方法均匀、牢固,已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。
        2.脂类物质:可将其在有机溶剂中溶解后加入Elisa板孔中,开盖置冰箱或冷风吹干,待酒精挥发后,让脂质自然干固在固相表面。
        3.小分子必须依靠和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。


   
二、包被液的选择
        一般选择pH9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于实验的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。需注意以下原理:由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用,这种物理吸附是非特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团,故更易吸附到固相载体表面。具体的试验还要有坚固的理论外也要实践,看一下zui终可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液,还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。

三、封闭
        继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙,从而排斥Elisa后的步骤中干扰物质的再吸附。常用封闭剂有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉,比较价廉,可以高浓度使用(5%-10%);还有一些稀有用到的各种动物血清(主要为了排除相似蛋白干扰)和酪蛋白等等。但zui终选用什么,要依据试验具体来实践。
   
        zui后上海劲马特别提醒,每次做尽量要把阴阳空三个对照做好,如出现问题也好分析。购买我公司Elisa试剂盒,有任何疑问都可业务员,我们将提供全程!我司由资深专家带头组建研发团队,十几年ELISA试剂盒开发经验,品质保障,值得信赖;BIM品牌试剂盒更是知名度高,已被国内重点实验室广泛使用,如北京生命科学研究所,中国科学院,协和医科大学等;被诸多国际权威刊物的文章广泛引用,如Nature, PNAS, Cell Research, Biomaterials等,目前SCI文章及国内核心期刊引用已达数百篇。专业技术团队提供完备的售前及售后服务,确保您实验成功!近期“积分换豪礼”活动火热进行中,有任何疑问,可来电咨询我司业务员!

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